原儿茶醛脑微透析探针的体内外回收率研究
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作者:佚名
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发布时间: 2022-09-26
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考察不同灌流速度、药物浓度对原儿茶醛脑微透析探针体内外正向和反向回收率的影响,以及体内外回收率的稳定性。
微透析技术是一种新的生物样品取样技术,具有实时、活体、原位、样品分析无需前处理等优点。近年来多用于靶向分布和体内代谢等方面的研究,尤其是治疗脑部疾病的药物研究,为评价药物的血脑屏障穿透性及新型药物的体内药动学提供重要依据。
原儿茶醛是天麻、乌蕨及丹参等中药的有效成分之一,可通过抗炎和神经保护等作用机制来发挥抗大鼠脑缺血/再灌注损伤的药理作用。本研究拟对原儿茶醛脑微透析探针的体内外回收率进行考察,以期为今后研究大鼠CIRI 模型的脑组织药代动力学特征提供参考。
1、动物脑微透析导管植入手术探针预处理:将探针置于肝素钠溶液中,提前用超纯水以1.0μl/min 的流速灌流冲洗20 min,洗脱新探针半透膜上封膜的甘油。
2、导管植入术:正常大鼠6 只,大鼠吸入2% 异氟烷麻醉后,固定俯卧在脑立体定位仪上,剃除大鼠头部被毛,剪开头皮后用双氧水去除肌肉组织充分暴露头骨。按大鼠脑图谱,以前囟作为定位基点,并根据坐标(AP:+3.2 mm;ML:+0.4 mm;DV:3.0 mm)标记右侧大脑皮层区,将带管心针的引导管绑在脑立体定位仪垂直臂上,定位准确后用颅钻钻孔并刺破硬脑膜。同时以此点作为参照在周围颅骨上继续钻2 个小孔,植入2 枚小螺钉,使3 孔连线成1个三角形保证套管稳定。引导管浸于5% 肝素钠溶液中,插入硬脑膜的腹侧垂直定位点,用牙科水泥固定并缝合创口。
3、干预方法:正常大鼠头部衔接微透析,采用取样时的流速灌流平衡1 h,通过股静脉注射原儿茶醛(100mg/kg),给药体积为0.5 ml/100g。
4、原儿茶醛脑微探针体外回收率的测定
探针回收率可用正、反透析法来测定。其中正透析法可以说明探针的真实回收率,反透析法则可显示体内回收率与真实回收率的统一性。研究选择正透析和反透析2 种实验方法来探究流速、浓度和探针稳定性对大鼠脑微透析探针体内外回收率的影响。
1.流速对原儿茶醛体内外回收率的影响体外实验结果表明,同一浓度的灌流液,原儿茶醛回收率随着流速的增加而降低。体内实验结果表明,随着流速的增加,原儿茶醛体内回收率降低。在不同流速(1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 μl/min)下,体内探针回收率略低于体外回收率。见图1。2. 浓度对原儿茶醛体内外回收率的影响体外实验结果表明,在3.13~25 μg/ml 药物浓度范围内,探针回收率基本无明显变化,且回收率未呈现浓度依赖性,证实药物浓度与探针的回收率无关,能够应用微透析法考察大鼠脑组织中原儿茶醛的实际浓度,见图2 A。体内实验结果表明,原儿茶醛浓度在3.133~25 μg/ml 内对探针回收率影响极小,检测到的回收率可校对不同浓度的透析液,得出大鼠脑组织中原儿茶醛的实际浓度,见图2 B。在不同浓度范围内,体内外探针回收率无明显差异,见图2 C。3.原儿茶醛体内外回收率稳定性的考察体外实验显示,设置流速为 1.5μl/min 时,探针的体外回收率PR=22.4%,RSD=6.54%;RR=19.5%,RSD=8.30%,证实探针在体外8 h 内的回收率稳定性较好。体内实验结果显示,脑探针的体内回收率=31.8%,RSD=6.19%,证明原儿茶醛体内脑探针8 h内回收率基本维持平稳,具有良好的稳定性。且体内外探针回收率在8h内基本保持一致。见图3。
结果显示,随着灌流液流速提高,原儿茶醛脑微透析探针回收率逐渐降低,原儿茶醛质量浓度不会影响脑微透析探针回收率,且8 h 内原儿茶醛脑微透析探针回收率基本保持稳定。微透析取样时,流速越快,半透膜两侧物质交换的效率越高,单位时间内收集的样品体积越多,但回收率越低;相反,流速越慢则回收率越高,但样品体积会减少。
本研究表明正、反透析法测得的原儿茶醛大鼠脑探针体外回收率基本相同,并且体外和体内透析法的相对回收率亦基本相同。本研究建立的原儿茶醛脑微透析方法,可为后期药动学及开发缺血性脑卒中的候选药物研究提供实验指导。
文献来源:孙航,杨琼英,宁珑等.原儿茶醛脑微透析探针的体内外回收率研究[R].上海中医药大学学报.2022.

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