大鼠血液及肺组织的微透析采样技术

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大鼠血液及肺组织的微透析采样技术

来源: | 作者:康森特生物科技 | 发布时间: 2024-06-07 | 735 次浏览 | 分享到:

采用微透析采样技术采集并测定大鼠血浆以及肺组织中的药物浓度，探索其药动学特点

微透析采样实验步骤

1、将大鼠进行麻醉、备皮与消毒。

2、大鼠气管切开插管，接通小动物呼吸机进行机械通气，将插管与气管固定并缝合皮肤。

3、肺探针植入：取出新的肺组织探针，将探针前端半透膜部分置于生理盐水中，浸泡15-20分钟，使半透膜充分浸润。同时，定位右侧胸壁第5、6肋间(大约为剑突上1指半到2指)，沿肋骨间隙斜向切开，用镊子钝性分离使肋骨充分暴露。通过止血钳离断第5肋骨，使之充分暴露右肺，无损伤镊轻轻提出右肺中叶，在脏层胸膜上作一小切口，沿切口向肺门方向斜向植入肺组织探针到肺组织内。轻轻复位肺叶，以4-0带线缝合将探针尾端固定于胸壁，防止脱落，逐层关闭胸腔)。PBS液灌注肺部探针，缓解创伤2h。

4、血管探针植入：取出新的血管探针，将探针前端半透膜部分置于生理盐水中，浸泡15—20分钟，使半透膜充分浸润。同时，沿右侧腹股沟斜行切开，用镊子钝性分离，使股动脉、股静脉及股神经分离，股静脉充分游离，带线结扎股静脉远端，股静脉近端用血管夹阻断，用剪刀剪取一段长约5mm的24号BD静脉留置针外层套管，将其一端剪成斜向尖锐口，用lml注射器针头在股静脉上作一小切口，将之前准备的套管用镊子沿切口植入股静脉中，血管夹松开后，管口可见血液流出，说明操作成功，再次夹上血管夹，血管探针顺套管放入股静脉中，松开血管夹，继续缓慢推送入下腔静脉，股静脉近心端带线结扎固定探针尾部。逐层关闭切口。PBS液灌注血管探针，缓解创伤2h。

5、探针相对回收率测定：采用反向透析法测算探针回收率。将1ug／mL被测物标准溶液，以2ul／min恒定速率灌注肺组织以及血管探针。经过50min动态平衡期后，每间隔10min采样，收集5份透析液样品，用以计算探针回收率。灌注液药物浓度(C_perf)和透析液药物浓度(C_dial)用高效液相质谱法(HPLC—MS)测定，最终回收率为5份样品平均值。相对回收率R_dial计算公式：R_dial=(C_perf—C_dial)／C_perf。